慢性粒细胞白血病染色体核型分析及其临床意义
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作者：杨颉 刘竹珍 吴春梅 赵洪国 陈兵 管洪在
【摘要】 目的 探讨慢性粒细胞白血病（CML）不同病期染色体核型特点及其临床意义。方法 采用R显带技术对124例CML病人进行了常规染色体核型分析，并动态观察部分病人病程进展中染色体核型的变化。结果124例病人中，Ph染色体阳性(Ph+)占93.55％(116/124)，Ph染色体阴性（Ph-）占6.45％（8/124）。Ph+病人中，94.83％(110/116)为典型Ph染色体易位，即t(9;22)(q34;q11)；5.17％(6/116)为变异型Ph染色体。11.21%（13/116）的Ph+病人出现额外染色体，其中慢性期、加速期和急变期额外染色体的检出率分别为7.48%(8/107)、33.33%（1/3）和66.67%（4/6）,加速期和急变期额外染色体的检出率明显高于慢性期(χ2=19.285，P<0.01)。额外染色体以+8、2Ph、-21和i（17q）多见。个别病例同时存在多个异常克隆，多见于CML急变期。结论 CML病人病程中继发额外染色体的异常改变与其病程进展密切相关，染色体核型分析对CML的诊断、治疗及预后判断具有重要意义。
【关键词】 白血病，髓样，慢性；费城染色体；额外染色体；核型分析
慢性粒细胞白血病(CML)是起源于多能干细胞的恶性骨髓增殖性疾病。90%以上CML病人白血病细胞中有恒定的、特征性的Ph染色体，其中绝大多数为典型易位即t(9;22)(q34;q11)，少数病人可有变异易位（包括简单变异易位和复杂易位）。随着病情进展，加速期和急变期病人可发生染色体核型演变，即出现Ph染色体以外的克隆性染色体异常[1]。染色体核型分析对CML的诊断、治疗、病情监测及预后判断具有重要的价值[2]。现将124例CML病人染色体核型分析结果报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
124例CML病人为青岛大学医学院附属各医院门诊及住院治疗的病人，其中男 76例，女48例；年龄13～74岁，平均42岁。慢性期 114例，加速期3例，急变期7例（3例初诊时为慢性期，分别于5个月～3年后急变）。CML的诊断和分期参照文献标准[3]。
1.2 染色体分析方法
采用骨髓细胞短期培养法（24 h）或外周血不加 PHA的短期培养法制备染色体标本，然后采用热处理姬姆萨R显带技术进行核型分析，113例病人分析10～20个分裂中期细胞，11例病人分析细胞数少于10个。核型异常参照人类细胞遗传学国际命名体制(ISCNI991)中的有关规定进行描述。124例CML病人共做 148例次染色体检查，其中大多数病例仅做 1次，部分病例作了2～3次检查。
2 结果
2.1 染色体的核型特点
本文124例病人中，Ph染色体阳性(Ph+)116例(占93.55％)，Ph染色体阴性(Ph-)8例(占6.45％)。其中慢性期病人中有107例Ph+(占86.29%)，3例加速期病人均为Ph+(占2.42%)，急变期病人中6例Ph+(占4.84%)。 Ph+病人中，94.83％(110/116)为典型 Ph染色体易位，即t(9;22)(q34;q11)，5.17％(6/116)为变异型染色体易位，如t(13;22)(q33;q11)、t(11;22)(p15;q11)、t(9;22;18)(q34;q11;q21)和t(1;22;7)(p36;q11;q22)等。
2.2 染色体核型演变特点
116例Ph+病人中有13例（11.21%）出现额外染色体，其中8例为慢性期病人，占慢性期病人总数的7.48%(8/107)；1例为加速期病人，占加速期病人总数的33.33%（1/3）；急变期病人4例，占急变期病人总数的66.67%（4/6），加速期和急变期额外染色体的检出率明显高于慢性期(χ2=19.285，P<0.01)，额外染色体以+8、2Ph、-21和i（17q）多见。3例病人同时存在2个异常克隆，1例病人同时存在3个异常克隆，这些病人均多见于急变期。
3 讨论
CML是一种造血干细胞的高度异质性疾病，Ph染色体是其最特异的染色体异常，由此而产生的bcr/abl基因重排是CML较为特征性的分子标志，也是客观准确地确定CML的主要依据[1]。文献报道，大约93％的CML病人Ph染色体阳性，7%的病人Ph染色体阴性。我们所检测的124例病人中Ph染色体阳性病人占93.55％，阴性病人占6.45%，与文献报道一致[4]。对于Ph-的CML可进一步分为Ph(-)bcr?abl(+)和Ph(-)bcr?abl(-)，前者仍属于Ph+的CML，后者可能并非真正的CML，而是不典型的其他骨髓增殖性疾病[5]。由此可见，染色体及融合基因的检测不仅有助于CML的诊断和鉴别诊断，而且可以对其进行细胞遗传学分型，细胞遗传学分型对CML的治疗具有重要的临床价值。
有资料显示，在Ph+的CML中，大约有94%病人有典型的Ph易位，而仅有约6%病人发生变异型Ph染色体易位，包括简单变异易位（22号与非9号之间的易位）和复杂变异易位（3条或更多条染色体易位）。在变异易位的病例中除Y染色体外，所有其他染色体均可被累及[6,7]。本研究结果与上述文献结果基本一致，大约94.83％的CML病人为典型 Ph染色体易位，5.17％为变异易位，如t(13;22)(q33;q11)、t(11;22)(p15;q11)、t(9;22;18)(q34;q11;q21)和t(1;22;7)(p36;q11;q22)等。简单易位的分子生物学研究结果显示，位于9号染色体长臂上的abl癌基因总是受累，都存在9q34和22q21的易位，表明简单变异易位实际上都存在着 9q34和 22q21的易位，也就是说所有的简单变异型 Ph染色体都可以看作是一定的检测手段检测不出来的复杂变异型 Ph染色体[8,9]。由此可见，变异易位和复杂易位都有共同的分子病理学改变，因此二者在临床、血液学表现和预后特征等方面几乎没有区别。
一般认为，在CML急变时70%的病人常出现额外染色体的改变，最多见的改变依次为+8, 2Ph和i(17q)。CORTES等[9]报道，慢性期、加速期和急变期CML病人核型演变的发生率分别为7.5%、40.0%、80.0%。本文CML病人慢性期、加速期和急变期核型演变的发生率分别为10.28%、66.67%和83.33%，与文献基本相似。本文还显示存在2个或3个异常克隆者主要见于急变期，这说明染色体核型演变主要和CML病情进展相关。最常见的额外染色体异常依次为+8、2Ph、-21和i（17q），三者可单独或联合出现，以+8合并2Ph最多见。另外，我们的临床随访还显示，部分病人检出额外染色体异常时，临床上尚无急变征象，表明核型演变往往和急变同时或更早发生。因此，CML病程中监测染色体核型的改变对预测CML病情进展及预后判断有一定价值。
一般而言，Ph染色体存在于CML的整个病程中，常规化疗对其无明显影响。但近来研究显示，Ph染色体的消长与治疗有一定的相关性，部分病人经骨髓移植或某些化疗药物治疗后Ph+细胞的百分比有所下降，少数甚至完全转阴[10]。因此，CML病程中进行染色体核型监测还有助于判断疗效。
【参考文献】
[1]许文荣,王建中. 临床血液学与检验 [M]. 第4版.北京：人民卫生出版社, 2007:268?272.
[2]姜道滋,陈志妹,楼基余,等. 1 193例慢性粒细胞白血病细胞及分子遗传学分析[J]. 中华血液学杂志, 2007,28:1?5.
[3]张之南. 血液病诊断及疗效标准[M]. 第2版.北京:科学技术出版社, 1998: 219?221.
[4]HEIM S, BILLSTROM R, KRISTOFFERSSON U, et al. Variant Ph translocation in chronic myeloid leukemia[J]. Cancer Genet Cytogenent, 1985,18:215?227.
[5]薛永权,过宇,顾建明,等. Ph染色体阴性和少见Ph易位慢性粒细胞白血病的细胞遗传学及分子生物学研究[J]. 中华医学杂志, 1993,73:209?212.
[6]AGSSAD M, OREB G, ZABED L. Karyotype analysis in chronic myelogenous leukemia. A three?year experience at the American University of Beirut Medical Center[J]. J Med Liban, 1998,46:16?19.
[7]HAGEMEIJER A, BARTRAM C R, SMITE M E, et al. Is the chromsomeal region 9q34 always involved in variant of the Ph translocation[J]? Cancer Genet Cytogenet, 1984,13:1?16.
[8]ISHIHARA T, MINAMIHISAMATSU M. The Philadephia chromosome, considerations based on studies of variant Ph translocations[J]. Cancer Genet Cytogenet, 1988,32:75?92.
[9]CORTES J E, TALPAZ M, GILES F, et al. Prognostic significance of cytogenetic clonal evolution in patients with chro?nic myelogenous leukemia on imatinib mesylate therapy[J]. Blood, 2003,101:3794?3800.
[10]王术国,管洪在,扈新花，等. 慢性粒细胞白血病smac和survivin基因表达及意义[J]. 青岛大学医学院学报, 2008,44(1):51?53.
【摘要】 目的 探讨慢性粒细胞白血病（CML）不同病期染色体核型特点及其临床意义。方法 采用R显带技术对124例CML病人进行了常规染色体核型分析，并动态观察部分病人病程进展中染色体核型的变化。结果124例病人中，Ph染色体阳性(Ph+)占93.55％(116/124)，Ph染色体阴性（Ph-）占6.45％（8/124）。Ph+病人中，94.83％(110/116)为典型Ph染色体易位，即t(9;22)(q34;q11)；5.17％(6/116)为变异型Ph染色体。11.21%（13/116）的Ph+病人出现额外染色体，其中慢性期、加速期和急变期额外染色体的检出率分别为7.48%(8/107)、33.33%（1/3）和66.67%（4/6）,加速期和急变期额外染色体的检出率明显高于慢性期(χ2=19.285，P<0.01)。额外染色体以+8、2Ph、-21和i（17q）多见。个别病例同时存在多个异常克隆，多见于CML急变期。结论 CML病人病程中继发额外染色体的异常改变与其病程进展密切相关，染色体核型分析对CML的诊断、治疗及预后判断具有重要意义。
【关键词】 白血病，髓样，慢性；费城染色体；额外染色体；核型分析
慢性粒细胞白血病(CML)是起源于多能干细胞的恶性骨髓增殖性疾病。90%以上CML病人白血病细胞中有恒定的、特征性的Ph染色体，其中绝大多数为典型易位即t(9;22)(q34;q11)，少数病人可有变异易位（包括简单变异易位和复杂易位）。随着病情进展，加速期和急变期病人可发生染色体核型演变，即出现Ph染色体以外的克隆性染色体异常[1]。染色体核型分析对CML的诊断、治疗、病情监测及预后判断具有重要的价值[2]。现将124例CML病人染色体核型分析结果报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
124例CML病人为青岛大学医学院附属各医院门诊及住院治疗的病人，其中男 76例，女48例；年龄13～74岁，平均42岁。慢性期 114例，加速期3例，急变期7例（3例初诊时为慢性期，分别于5个月～3年后急变）。CML的诊断和分期参照文献标准[3]。
1.2 染色体分析方法
采用骨髓细胞短期培养法（24 h）或外周血不加 PHA的短期培养法制备染色体标本，然后采用热处理姬姆萨R显带技术进行核型分析，113例病人分析10～20个分裂中期细胞，11例病人分析细胞数少于10个。核型异常参照人类细胞遗传学国际命名体制(ISCNI991)中的有关规定进行描述。124例CML病人共做 148例次染色体检查，其中大多数病例仅做 1次，部分病例作了2～3次检查。
2 结果
2.1 染色体的核型特点
本文124例病人中，Ph染色体阳性(Ph+)116例(占93.55％)，Ph染色体阴性(Ph-)8例(占6.45％)。其中慢性期病人中有107例Ph+(占86.29%)，3例加速期病人均为Ph+(占2.42%)，急变期病人中6例Ph+(占4.84%)。 Ph+病人中，94.83％(110/116)为典型 Ph染色体易位，即t(9;22)(q34;q11)，5.17％(6/116)为变异型染色体易位，如t(13;22)(q33;q11)、t(11;22)(p15;q11)、t(9;22;18)(q34;q11;q21)和t(1;22;7)(p36;q11;q22)等。
2.2 染色体核型演变特点
116例Ph+病人中有13例（11.21%）出现额外染色体，其中8例为慢性期病人，占慢性期病人总数的7.48%(8/107)；1例为加速期病人，占加速期病人总数的33.33%（1/3）；急变期病人4例，占急变期病人总数的66.67%（4/6），加速期和急变期额外染色体的检出率明显高于慢性期(χ2=19.285，P<0.01)，额外染色体以+8、2Ph、-21和i（17q）多见。3例病人同时存在2个异常克隆，1例病人同时存在3个异常克隆，这些病人均多见于急变期。
3 讨论
CML是一种造血干细胞的高度异质性疾病，Ph染色体是其最特异的染色体异常，由此而产生的bcr/abl基因重排是CML较为特征性的分子标志，也是客观准确地确定CML的主要依据[1]。文献报道，大约93％的CML病人Ph染色体阳性，7%的病人Ph染色体阴性。我们所检测的124例病人中Ph染色体阳性病人占93.55％，阴性病人占6.45%，与文献报道一致[4]。对于Ph-的CML可进一步分为Ph(-)bcr?abl(+)和Ph(-)bcr?abl(-)，前者仍属于Ph+的CML，后者可能并非真正的CML，而是不典型的其他骨髓增殖性疾病[5]。由此可见，染色体及融合基因的检测不仅有助于CML的诊断和鉴别诊断，而且可以对其进行细胞遗传学分型，细胞遗传学分型对CML的治疗具有重要的临床价值。
有资料显示，在Ph+的CML中，大约有94%病人有典型的Ph易位，而仅有约6%病人发生变异型Ph染色体易位，包括简单变异易位（22号与非9号之间的易位）和复杂变异易位（3条或更多条染色体易位）。在变异易位的病例中除Y染色体外，所有其他染色体均可被累及[6,7]。本研究结果与上述文献结果基本一致，大约94.83％的CML病人为典型 Ph染色体易位，5.17％为变异易位，如t(13;22)(q33;q11)、t(11;22)(p15;q11)、t(9;22;18)(q34;q11;q21)和t(1;22;7)(p36;q11;q22)等。简单易位的分子生物学研究结果显示，位于9号染色体长臂上的abl癌基因总是受累，都存在9q34和22q21的易位，表明简单变异易位实际上都存在着 9q34和 22q21的易位，也就是说所有的简单变异型 Ph染色体都可以看作是一定的检测手段检测不出来的复杂变异型 Ph染色体[8,9]。由此可见，变异易位和复杂易位都有共同的分子病理学改变，因此二者在临床、血液学表现和预后特征等方面几乎没有区别。
一般认为，在CML急变时70%的病人常出现额外染色体的改变，最多见的改变依次为+8, 2Ph和i(17q)。CORTES等[9]报道，慢性期、加速期和急变期CML病人核型演变的发生率分别为7.5%、40.0%、80.0%。本文CML病人慢性期、加速期和急变期核型演变的发生率分别为10.28%、66.67%和83.33%，与文献基本相似。本文还显示存在2个或3个异常克隆者主要见于急变期，这说明染色体核型演变主要和CML病情进展相关。最常见的额外染色体异常依次为+8、2Ph、-21和i（17q），三者可单独或联合出现，以+8合并2Ph最多见。另外，我们的临床随访还显示，部分病人检出额外染色体异常时，临床上尚无急变征象，表明核型演变往往和急变同时或更早发生。因此，CML病程中监测染色体核型的改变对预测CML病情进展及预后判断有一定价值。
一般而言，Ph染色体存在于CML的整个病程中，常规化疗对其无明显影响。但近来研究显示，Ph染色体的消长与治疗有一定的相关性，部分病人经骨髓移植或某些化疗药物治疗后Ph+细胞的百分比有所下降，少数甚至完全转阴[10]。因此，CML病程中进行染色体核型监测还有助于判断疗效。
【参考文献】
[1]许文荣,王建中. 临床血液学与检验 [M]. 第4版.北京：人民卫生出版社, 2007:268?272.
[2]姜道滋,陈志妹,楼基余,等. 1 193例慢性粒细胞白血病细胞及分子遗传学分析[J]. 中华血液学杂志, 2007,28:1?5.
[3]张之南. 血液病诊断及疗效标准[M]. 第2版.北京:科学技术出版社, 1998: 219?221.
[4]HEIM S, BILLSTROM R, KRISTOFFERSSON U, et al. Variant Ph translocation in chronic myeloid leukemia[J]. Cancer Genet Cytogenent, 1985,18:215?227.
[5]薛永权,过宇,顾建明,等. Ph染色体阴性和少见Ph易位慢性粒细胞白血病的细胞遗传学及分子生物学研究[J]. 中华医学杂志, 1993,73:209?212.
[6]AGSSAD M, OREB G, ZABED L. Karyotype analysis in chronic myelogenous leukemia. A three?year experience at the American University of Beirut Medical Center[J]. J Med Liban, 1998,46:16?19.
[7]HAGEMEIJER A, BARTRAM C R, SMITE M E, et al. Is the chromsomeal region 9q34 always involved in variant of the Ph translocation[J]? Cancer Genet Cytogenet, 1984,13:1?16.
[8]ISHIHARA T, MINAMIHISAMATSU M. The Philadephia chromosome, considerations based on studies of variant Ph translocations[J]. Cancer Genet Cytogenet, 1988,32:75?92.
[9]CORTES J E, TALPAZ M, GILES F, et al. Prognostic significance of cytogenetic clonal evolution in patients with chro?nic myelogenous leukemia on imatinib mesylate therapy[J]. Blood, 2003,101:3794?3800.
[10]王术国,管洪在,扈新花，等. 慢性粒细胞白血病smac和survivin基因表达及意义[J]. 青岛大学医学院学报, 2008,44(1):51?53.